生物缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时保持溶液的pH值相对稳定的溶液,多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动,需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生化研究工作中,常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。生物缓冲液的种类多,用途广,需根据实际应用选择合适的体系。
1. PB缓冲液(磷酸盐缓冲液)
磷酸盐缓冲液又称PB缓冲液,是应用很广泛的缓冲液。由于其二次离解作用,缓冲液pH值范围较宽,可配置不同pH值的酸性、碱性和中性缓冲液。
PB缓冲液的优点:
①易于配制成各种浓度 ;
②pH值范围宽;
③pH受温度的影响小。
PB缓冲液的缺点:
①易与常见的钙、镁、重金属离子形成沉淀;
②抑制某些生化过程。
2. Tris缓冲液
Tris缓冲液在生物化学研究中有着广泛的应用。它是弱碱,通常在“中性”范围内使用。
Tris缓冲液的优点:
①因为Tris碱的碱性较强,所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液;
②对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。
Tris缓冲液的缺点:
①缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释十倍,pH值的变化大于0.1;
②温度效应大,温度变化对缓冲液pH值的影响很大,所以一定要在使用温度下进行配制,室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃~4℃;
③易吸收空气中的CO2,所以配制的缓冲液要盖严密封;
④它对某些pH电极发生一定的干扰作用,所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。
3. 甘氨酸缓冲液
甘氨酸缓冲液pH值范围广,应用范围广。pH值范围为2.0~11.0。最常见的体系和pH值范围如下表所示:
甘氨酸缓冲液 pH值范围
甘氨酸-HCl 2.0~5.0
甘氨酸-NaOH 8.0~11.0
甘氨酸-Tris 8.0~11.0
甘氨酰胺缓冲液 7.8~8.8
甘氨酰甘氨酸缓冲液 8.0~9.0
甘氨酸缓冲液的优点:为细胞成分和各种提取物提供更亲近的自然环境。
甘氨酸缓冲液的缺点:类似于磷酸盐缓冲体系;干扰某些生化反应过程,例如代谢过程。