11875RPMI Medium 1640 细胞培养的详细资料:
RPMI Medium 1640 细胞培养
细胞复苏实验准备:
主要器材:一次性滴管、打火机、酒精灯、大镊子、中镊子、记号笔、废液缸、封口膜、剪子。
主要试剂: PBS、培养液、消化酶(胰酶)、75%酒精、双抗。
PBS配制:NaCL :4g KCL:0.1g Na2HPO4 :1.745g KH2PO4 :0.1g
三蒸水: 500mL,溶解后高压灭菌。
培养基配制:5mL双抗、50mL血清,加入培养基中。
细胞复苏操作步骤:
1.佩戴眼镜和手套,从液氮罐中取出安瓿或冷冻管。
2.迅速放入38℃水浴中,并不时摇动,在1分钟内使其*融化,然后在无菌下取出细胞。
3.在1000r/min速度下离心5~10分钟,弃去上层液,加入适量培养液后接种于培养瓶中,接种浓度1×109/L,置37℃温箱静置培养,次日更换一次培养液,继续培养,观察生长情况。若细胞密度较高,及时传代。或无需离心直接将细胞加入瓶中,并加入培养基贴壁培养12~24小时后,充去上清,换入新鲜培养基继续培养。
平时研究用的细胞,有需要冷冻保存。冷冻的过程称为冻存,把冻上的细胞化开的过程叫细胞复苏。细胞复苏是一简单的试验操作,但操作中有许多需要注意的事项,在实验操作中注意细小问题,才能使复苏后的细胞状态保持良好。
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