SRANKL试剂盒

1、SRANKL试剂盒实验原理

SRANKL试剂盒是一种酶联放大的两步夹心法免疫检测试剂盒。在此实验中，标准品、质控品和未知样品在包被了抗IGFBP-3单克隆抗体的微孔板中温育。温育之后洗板，再加入辣根过氧酶标记的抗IGFBP-3抗体。第二次温育后再洗板，再向微孔中加入TMB底物液。之后再加入酸性终止液，用双波长450nm和620nm检测底物的酶反应程度。

检测到的OD值直接与样品中IGFBP-3的浓度成正比。实验使用了一套IGFB-3标准品，用标准的OD值对IGFBP-3的浓度可做出一条标准曲线，之后质控品和未知样品中的IGFBP-3浓度就可以从此标准曲线上定量得到。

2.成分

胰岛素样生长因子结合蛋白-3试剂盒为96孔检测提供了足够的试剂成份。每个试剂盒包括如下试剂成份：

注意：使用稀释缓冲液作为零标准品

标准品的校准是使用NIBSC/WHO 重溶的IGFBP-3，参考试剂编号93/560。

3.没有提供的材料

1 好质量的蒸馏水

2 移液器 50ul、100ul、1ml（使用一次性吸嘴）

3 塑料管，用于样本稀释

4 混合器

5 电磁搅拌器

6 洗板机

7 450nm酶标仪，参考波长650nm。

4.准备

标准品：

使用1ml的蒸馏水重溶标准品。使用稀释缓冲液作为零标准品。

质控品：

使用1ml的蒸馏水重溶质控品。

酶联物：

制备适当体积酶联物溶液，例如：100ul的20倍浓缩的酶联物加至2ml的酶联物缓冲液中。使用混合器混匀，建议临时制备。

洗涤液：

制备适当体积的即用型洗涤液，通过加入199份的蒸馏水至1份的200倍浓缩的洗涤液，使用一个电磁搅拌器混匀。

5.样本的制备

血清必须保存在2-8℃

如果实验没有在24小时内进行，建议分装保存在-20℃，避免反复冻融。使用前，所有的样本应该平衡至室温。建议使用前混匀样本。

不能使用溶血的样本。

6.实验步骤：

1. 在塑料试管中标记好每个样本
2. 每管加入1ml的稀释缓冲液
3. 将10ul的样本加入试管中
4. 混匀样本，重溶好标准品和质控品
5. 每次实验选择好所需要的板条。不使用的板条应重新与干燥剂一起于密封袋中，保存在2-8℃。
6. 将板条固定于板架上
7. 移取100ul 的稀释缓冲液当零标准品

  加入100ul的标准品、质控品、稀释的样本至相应的孔中

1. 每孔加入50ul的酶联物溶液
2. 在室温下温育2小时
3. 倒出孔中溶液
4. 洗板3次
5. 在洗板后的15分钟内，每孔加入100ul的显色剂
6. 于室温下温育30分钟
7. 每孔加入100ul的终止液
8. 在1小时内450nm酶标仪下读数（参考波长为630nm或者650nm）。

7.应用范围

该试剂盒为酶联免疫试验检测人清中的胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）。

更多访问：

http://www.craymeibio.cn/Products-24213759.html
https://www.chem17.com/st286595/erlist_1297457.html